血清通常在細胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑。常用血清是胎牛血清(FBS),也稱FCS。胎牛血清是從適合人類衛(wèi)生習慣的農(nóng)場收集的。有時,也可能用其他的牛血清,如新生牛血清或者供體牛血清。在細胞培養(yǎng)中,血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,低分子量營養(yǎng)物,疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護細胞的作用。在細胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學成分,培養(yǎng)細胞的類型和培養(yǎng)體系而定。
1、采集
在胎牛血清生產(chǎn)過程中,全血使用無菌一次性塑料袋收集,待凝結(jié)后分離,收集和冷凍儲存血清??刂铺ヅQ宓某跏际占强刂平K血清產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素。只有初始原料符合我們的規(guī)范時才能允許生產(chǎn)。
2、血清原料
在市場存在兩個胎牛血清標準:美國農(nóng)業(yè)部標準(USDA)和歐洲標準。美國農(nóng)業(yè)部標準,原始血清必須采自未發(fā)生瘋牛?。˙SE)和口蹄疫(FMD)疫情的國家,才可自由進口到任何國家,用于安全生產(chǎn)。而且研究者只有使用符合這種標準的血清,才被允許將其細胞和細胞產(chǎn)品送至其他同樣有嚴格進口條款的國家,進行合作交流。
3、處理過程
優(yōu)選數(shù)個批次凍存血清進行解凍,檢驗其內(nèi)毒素和血紅素的含量,滿足標準的才能在冷藏條件下充分混合繼續(xù)加工,進一步進行過濾除菌。BioInd依次通過預過濾和膜過濾來處理胎牛血清。zui后的過濾步驟為連續(xù)三次用100nm的濾膜過濾。過濾結(jié)束,血清采用無菌工藝進行分裝,整個過程有效確保zui終產(chǎn)品無菌。血清生產(chǎn)的空氣潔凈度為100級。所有分裝工作臺都通過高效微??諝膺^濾器過濾,并保持正壓分裝環(huán)境,對總微粒、懸浮微粒數(shù)和壓力進行監(jiān)控。分裝后,終產(chǎn)品迅速-20度凍存,并隔離,直到所有的質(zhì)量控制檢測完成。
4、FBS質(zhì)量控制
每批胎牛血清檢測確認符合各項標準,并以書面的方式記錄在質(zhì)檢報告中。
具體優(yōu)勢:
本胎牛血清不僅適用于常規(guī)的細胞培養(yǎng),更適合用于一些要求較高的細胞的培養(yǎng)。
血清憑借其優(yōu)良的品質(zhì)、*的可靠性和良好的技術(shù)支持,贏得廣大研究人員的信任。
本胎牛血清從血液收集到終產(chǎn)品檢驗和審核的每一個步驟,都采用設(shè)備和標準操作程序,保證高品質(zhì)和各批次的一致性。所有操作符合GMP (Good Manufacturing Practices for Drug)標準。
本產(chǎn)品符合美國的FDA質(zhì)量體系要求,pH值、滲透壓、血紅蛋白濃度、內(nèi)毒素水平、總蛋白等多項指標檢測合格,無細菌、真菌、支原體及病毒污染,具有高質(zhì)量和高穩(wěn)定性。
本胎牛血清來源清晰,具有可追溯性。本血清來源于澳洲。
本胎牛血清為*制品,不含任何人為的添加成分,可應(yīng)用于各種常規(guī)的細胞培養(yǎng),特別適合于一些要求較高的細胞的培養(yǎng),為細胞提供必須的營養(yǎng)物質(zhì)和多種生長因子,有效促進細胞生長。
胎牛血清使用中的常見問題(不*整理)
1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
3、實驗室如何選擇適合的血清?
國內(nèi)一致認為HYCLONE的血清是好的,但是根據(jù)我在北美的經(jīng)歷,國外一般認為GIBCO比HYCLONE好,所以并不是價格決定質(zhì)量,但是總的來說這兩種價格普遍偏貴,一般不是太嬌氣的細胞,國產(chǎn)的就夠用了。此外,由于國內(nèi)HYCLONE,GIBCO并沒有生產(chǎn)線,我們只能從代理商那里買,而代理商又魚龍混雜,所以買到假貨的可能性也很大。所以,我一般會從直銷員那里買血清,有的國外生物公司由于剛剛進入中國,度不高,但是其實在國外已經(jīng)做得很不錯了,如Wisent等,他們在國內(nèi)有辦事處,我會從那里拿,血清的品質(zhì)和HYCLONE不相上下,但價格相對優(yōu)惠很多。
4、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。