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技術(shù)文章首頁(yè) > 技術(shù)文章 CST抗體相關(guān)問(wèn)題解答(二)
  • CST抗體相關(guān)問(wèn)題解答(二)
  • 點(diǎn)擊次數(shù):2783 更新時(shí)間:2016-02-21
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  •    之前的《CST抗體相關(guān)問(wèn)題解答(一)》中,我們給大家介紹過(guò)幾個(gè)關(guān)于CST抗體的相關(guān)問(wèn)題,本文再給大家說(shuō)說(shuō)CST抗體其他的一些疑問(wèn)。

      1、CST抗體是否適用于全組織樣本裂解物?

      答:CST 并未測(cè)試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物,但是 CST 的很多抗體已經(jīng)被其他客戶(hù)用于整個(gè)組織而且取得成功。

      2、CST抗體可用于免疫組化嗎 ?

      答:檢測(cè)抗體是否可用于福爾馬林固定石蠟包埋樣本,是CST 的一項(xiàng)常規(guī)檢測(cè)。那些通過(guò)嚴(yán)格驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的抗體才會(huì)被推薦用作 IHC-P。我們也在新鮮冰凍組織樣本上檢測(cè)抗體,那些染色成功的才會(huì)被推薦用作 IHC-F。那些推薦應(yīng)用里面沒(méi)有列出 IHC-P 或者 IHC-F 的,可能已經(jīng)失敗,或者沒(méi)有被檢測(cè),或者我們沒(méi)有用作檢測(cè)的特別的組織樣本。建議你 CST,我們可能有該抗體在其它系統(tǒng)表現(xiàn)良好的數(shù)據(jù)?;蛘?,我們可能有適用于組織染色的更好的其它產(chǎn)品。

      3、假如說(shuō)明書(shū)上某個(gè)種屬未被列出與 CST抗體有交叉反應(yīng),是否意味著這個(gè)種屬未被檢測(cè)過(guò)呢?

      答:如果可能的話(huà),CST 科學(xué)家檢測(cè)所有 CST 抗體在人、小鼠和大鼠的交叉反應(yīng)性。假如我們沒(méi)有獲得某個(gè)種屬的陽(yáng)性結(jié)果,我們就不會(huì)列出這個(gè)種屬。然而,有可能我們檢測(cè)的這個(gè)細(xì)胞系包含一個(gè)低水平的特定蛋白,或者,我們使用的操作對(duì)于那個(gè)特定的細(xì)胞系不起作用。因此,我們建議你比較所研究種屬和 CST 抗體驗(yàn)證種屬修飾位點(diǎn)附近的肽段序列 ( 每邊 5 個(gè)氨基酸 )。在很多情況下,CST 抗體由免疫人的蛋白序列產(chǎn)生,并通過(guò)親和層析高度純化。很多時(shí)候,如果序列相同,或者在非磷酸化位點(diǎn)只有 1 或者 2 個(gè)氨基酸的不同時(shí),CST 抗體很有可能識(shí)別你的蛋白。但是,我們不能保證其實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

      4、使用 CST抗體時(shí),為什么我不能使用我自己實(shí)驗(yàn)室的 Western blot 操作流程?

      答:CST抗體經(jīng)過(guò)優(yōu)化以提供zui強(qiáng)的信號(hào)、zui少的背景,使用 CST 推薦的Western blot 操作流程,對(duì)于終端客戶(hù)的優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約時(shí)間和材料。

      5、為什么CST抗體用于 Western blot 效果不佳?

      答:這里有幾個(gè)關(guān)于 CST Western blot 流程的細(xì)節(jié),對(duì)于避免丟失信號(hào)或高背景是非常關(guān)鍵的。

      • 不要過(guò)度清洗膜。應(yīng)在 TBS/0.1% Tween-20 中清洗三次,每次5分鐘。過(guò)度的清洗會(huì)洗掉一抗。推薦的清洗條件已經(jīng)過(guò)優(yōu)化以獲得的信噪比,因此是zui強(qiáng)、zui干凈的結(jié)果。

      • 不要過(guò)度封閉 ( 例如超過(guò) 1 小時(shí)或者過(guò)夜 )。在一些抗體中發(fā)現(xiàn),過(guò)度封閉會(huì)減少特異信號(hào)。確保查閱每個(gè)產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)以得到每個(gè)抗體推薦的封閉時(shí)間。

      • 一般來(lái)說(shuō),針對(duì)兔多抗或兔單抗,使用抗兔二抗:#7074;針對(duì)鼠單抗,使用抗鼠二抗:#7076。

      • 確認(rèn)抗體的說(shuō)明書(shū)上交叉反應(yīng)部分有列出你所檢測(cè)的種屬。

      • 確認(rèn)你的上樣量達(dá)到 20 μg 細(xì)胞裂解液。

      • 確認(rèn)誘導(dǎo)的細(xì)胞裂解液樣本蛋白已活化。

      如果您對(duì)于CST抗體還有其他的疑問(wèn),咨詢(xún),我們竭誠(chéng)為您解答。

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