PEI轉染試劑是通過納米技術合成,通過物理作用與核酸結合,濃縮包裹核酸,從而保護核酸免受免疫系統(tǒng)破壞,同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分,由于處于納米尺度,粒徑小,不易引起免疫反應,不影響動物和器官組織的功能,可以多次在同一動物注射。
PEI轉染試劑的分類:
第1代陽離子納米聚合物轉染試劑,系聚乙二胺類轉染試劑,占到市場上90%以上,十分適合于一般實驗。但用于新藥研究,三期臨床有風險。因為細胞毒性大。
第2代陽離子納米聚合物轉染試劑,系聚alpha賴氨酸組氨酸類轉染試劑,大大降低了細胞毒性。
第3代陽離子納米聚合物轉染試劑,系聚epsilon賴氨酸組氨酸類轉染試劑,基本消除了細胞毒性。國內(nèi)已有生產(chǎn)。
PEI轉染試劑的操作流程:
1、細胞鋪板:
提前一天將細胞種植在六孔板中,以轉染時細胞密度在70%~80%為宜。
2、轉染過程:
?、佟⒃谵D染前2h,移除細胞上原有的培養(yǎng)基,換為新鮮的*培養(yǎng)基。
?、?、將2ug質(zhì)粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋,充分混勻制成DNA稀釋液。
?、?、向DNA稀釋液中直接加入4uL轉染試劑,室溫靜置10~15min。轉染復合物配制完成。
?、堋⑥D染復合物加入細胞培養(yǎng)基中,輕柔混勻。
?、荨⒗^續(xù)培養(yǎng)24~48h,收取細胞進行鑒定或加入相應抗生素篩選穩(wěn)定克隆。
?、蕖⑹褂帽井a(chǎn)品轉染后一般在24h開始進入表達高峰期,36~48h達到表達高峰,相對于脂質(zhì)體轉染試劉,達到峰值的時間延后約6~12h。